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临床使用常见问题解答

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 一、试剂为什么不能从冰箱中拿出后直接使用?
      答:试剂温度过低,在反应室内易发生冷凝集,从而影响结果的准确性。正确的方法是从冰箱取出试剂后,室温平衡十分钟左右。

      二、凝胶卡存放的最适条件?
      
答:温度:18-25度保存; 避免阳光直射。

      三、为什么凝胶卡做抗人球实验可免除洗涤?
      
答:因为RBC的密度远大于血清中的球蛋白,在给定的离心条件下,当离心时,RBC的沉降速率远大于球蛋白,故RBC首先和凝胶中的抗人球蛋白反应,而不受血清中的球蛋白干扰,从而可免除洗涤这一步骤。

      四、为什么用凝胶卡要先加细胞后加血清?
      
答:因为加细胞的量要比加血清的量大,先加细胞,可以在反应腔内形成大而充分的反应界面,与后加入的血清反应效果良好。

      五、镰刀形红细胞贫血病人在做血型配血时易出现假阳性,为什么? 
      
答:正常的红细胞有一定的变形性,可以通过小于其直径的凝胶间隙,而镰形红细胞贫血的病人红细胞变形能力降低,刚性增大,不能透过凝胶间隙,故出现假阳性。

      六、严重感染的病人易出现假阳性,为什么? 
      
答:病人血清或血浆中的白细胞过多,堵塞了凝胶间隙,从而影响了红细胞的沉降,造成假阳性。

      七、除第五、第六外微柱凝胶假阳性和假阴性反应常见原因
       
1假阳性反应可见于:
      (1)未完全去除纤维蛋白原的血清标本,残存纤维蛋白原在凝胶中成为纤维蛋白,阻碍红细胞沉淀而浮于胶中或胶表面。
      (2)被检标本染菌也使红细胞浮于胶中或胶表面。
      (3)被检红细胞破碎,常见是因为红细胞陈旧,此时即使应该是阴性结果,这是因为离心时微柱管离心力方向和该微管轴方向不一致,本应为阴性的结果的沉淀位置偏离,而拟弱阳性反应。
      (4)离心后红细胞沉淀在微柱凝胶管底及近底部一侧,而不是在管底尖部。此为离心时微柱管离心力方向和该微管轴向方向不一致,本应为阴性结果的沉淀位置偏离而呈拟弱阳性反应。
      (5)实验室温度低时,因凝胶颗粒活动性减少,单个红细胞穿过时困难,易出现假阳性结果。
       2 假阴性反应。
      (1)抗原或抗体过少、过弱。
      (2)抗原、抗体比例不合适,如前带或后带的现象。
      (3)离心力过大,使弱阳性成为阴性格局。

      八、溶血反应现象有哪些原因及临床意义
       
1实验操作者错误或实验标本有问题
      发生溶血反应不一定就是抗原抗体特异性反应所致,可能的原因有:
      (1)反应液是低渗透压溶液;
      (2)受过热或过冷温度影响;
      (3)红细胞或抗体被细菌等污染;
      (4)其他使红细胞破坏的物理、化学因素。
       2可能是因为红细胞抗原抗体溶血性反应
      (1)红细胞抗原与特异性抗体结合,激活补体,作用于红细胞膜,使之破裂,发生溶血。
      (2)红细胞抗原与特异性抗体结合,未激活补体,但因受到血清中其他因子作用而溶血。
       3溶血的临床意义
      一定不能将溶血标本认定是阴性反应,一定要将其记录为溶血反应,不要记录为阳性反应,更不能记录为阴性反应。而且要高度警惕:
      (1)发生溶血标本所相应的血液中可能存在阳性的红细胞抗原抗体反应,对患者极有可能有危险,即可能是受供者血型不相容所致,此时抗体应明确为临床有意义抗体。
      (2)也极可能是在工作中那个步骤发生了错误。因此,一定不要输用其标本已发生溶血的血液。首先要取新的一份血液,取其标本,应用传统试管血凝法和微柱凝胶方法同时对比检测,选择相容的血液进行输血;一定要在短期内继续查找此次溶血的原因。

      九、什么是IgG不完全抗体的Coombs试验?
      
人 红细胞表面抗原与不完全抗体结合(常是IgG类抗体),即不完全抗体致敏红细胞,由于该不完全抗体分子量小或和其两个Fab段扩张角度小,不能使相邻红细 胞桥联,红细胞仍是分散状况,不出现肉眼可见的红细胞凝集现象。在反应体系中,加入针对该抗体的抗体,即抗抗体,该抗抗体Fab段结合红细胞上不完全抗体 Fc段,出现肉眼可见的红细胞凝集现象。

      十、什么是Coombs试验的应用
       
1直接抗人球蛋白试验;
      (1)对新生儿溶血病(HDN)胎儿(婴儿)红细胞检测;
      (2)输血反应;
      (3)其他溶血性疾病;
       2间接抗人球蛋白试验;
      (1)检测体内不规则抗体;
           ①  妊娠妇女;
           ②  献血者;
           ③  受血者或有过输血史的人;
      (2)交叉配血试验;
      (3)对已发现抗体鉴定;
      (4)对一些血型抗原的检测,如D弱型,Kell 、Duffy 、Kidd和其他血型检测。

      十一、什么是完全抗体和不完全抗体?
       
在 适当的介质(液体、凝胶等)中,能够与相应特异性抗原出现肉眼可见的免疫反应(凝集反应、沉淀反应或溶血反应)的抗体,称之完全抗体;在适当介质中,不能 出现肉眼可见的免疫反应的抗体被称之不完全抗体。IgM类抗体一般是完全抗体,IgG类抗体一般是不完全抗体,但IgG类抗体并不都是不完全抗体,一些 IgG抗体与其特异性红细胞抗原结合,也出现肉眼可见的凝血反应或溶血反应。完全抗体和不完全抗体分类一般指抗体的免疫反应性质,即以能否出现肉眼可见免 疫反应而区分。

      十二、什么是规则抗体和不规则抗体?
       
人 体内产生的抗体一般都是外来的自身体内部存在的抗原所免疫,产生的抗体,称之为规则抗体。人体内抗体的特异性是针对自身体内已有的抗原,该类抗体称之为不 规则抗体。对ABO血型,A型人只有抗B,B型人只有抗A,O型人有抗A,B,AB型人没有抗A和抗B,这些抗体为规则抗体;如果A型人有抗A,B型人有 抗B,AB型人出现抗A或和抗B,血型血清学确定的ABO血型,如抗原弱表达的Ax型人,这些抗体为不规则抗体。D表性阳性人体内出现的抗D抗体,抗体如 果经研究确定了该抗体是针对该人红细胞表面所缺乏的D抗原表位(该D阳性红细胞是D抗原表位部分缺失型)则该抗D是规则抗体。应强调,只有在免疫遗传学, 在抗原分子水平已经确定了是D抗原表位部分缺失型所产生的抗D之时,将该抗体,明确为规则抗体,但是在临床上发出D抗原表型阳性人出现抗D在对其详细深入 研究之前,首先将其作为不规则抗体。
       规则抗体和不规则抗体分类的根据是免疫遗传学基本理论,即抗体产生的一般规则。

      十三、什么是意外抗体和非意外抗体?
       
1在 临床血型血清学工作中发现的ABO血型不规则抗体,D表性阳性人体内出现的抗D抗体(不论是否已经确定其是D抗原表位不完全型),以及具有获得型B型红细 胞的人检测出的抗A等,都称之意外抗体。意外抗体包括了在临床血型血清学检测中遇到的所有异常的"意外"抗体。反之,正常的,规则抗体均为非意外抗体。
       2意外抗体和非意外抗体,分类主要是指临床血型血清学检测中遇到的异常、"意外"的抗体或者是正常的规律性抗体。D阴性人血清中检出抗D抗体,不将其称为意外抗体,因对D阴性人,应预料到并高度注意血清中可能有抗D抗体。

      十四、什么是临床有意义抗体和无意义抗体?
       
ABO 血型、Rh血型不相容输血或胎母血型不相容妊娠等情况产生的ABO、Rh血型抗体,能够引起输血反应或新生儿溶血病,这类抗体都是临床有意义抗体,凡是在 临床上能发生同种异体免疫反应,如溶血,血细胞减少等病症的血型抗体,都是临床有意义抗体。而对于有些血型系统,如P血型,即使是该血型不相容输血或妊 娠,可能产生P血型同种异体抗体,但并不发生溶血性反应和新生儿溶血病,此类抗体称之临床无意义抗体。临床无意义抗体,指的是一般规律,在一般情况不产生 同种异体血型免疫反应,但是个别情况,对少数病例可能产生病症,甚至严重的输血反应或新生儿溶血病,如MN血型。故临床上不能将这些抗体绝对地称之临床有 意义抗体或无意义抗体。

       十五、有关Rh试验的其他问题

   

我们将假阳性反应及假阴性反应做进一步说明。
一、假阳性反应,情况会导致红细胞定型结果为假阳性。抗D为灰色;抗C为粉红色;抗E为棕色;抗c为暗绿色;抗e为绿色;抗CDE为橘黄色。试 剂中存在意外抗体,针对人群中出现频率小于1%的抗原的抗体偶尔也会引起假阳性反应。这些抗体发生率低,即使是无输血也常会有相应的抗体,抗体的混合物并 不罕见,可能是除人红细胞外的其他抗原刺激产生的。
二、下面情况可导致红细胞定型出现假阴性结果。
(一)误用错误的抗血清或其他一些颜色相近的试剂。
(二)试管中没有加抗血清。
(三)一种特异性血清不能与抗原的某种变异形式反应。例如,抗e血清不一定与黑人中较常见的e抗原变异体反应。较少见的还有抗E血清也可能与EW抗原反应弱或不反应。
(四)抗血清主要含直接抗顺式Rh抗原的抗体。用其检查带有独立基因产生的个体抗原的红细胞,其结果是不可靠的。最常见的抗C血清,其与R1或r产生的抗原的反应总比Rz或Ry产生的C抗原反应强。
(五)没有遵循试剂使用说明,而不正确地使用抗血清,例如,血清与红细胞的比例不合算,孵育温度或孵育时间不正确。
(六)离心后看结果时过度用力振摇试管,会使红细胞的弱凝集消失。
(七)抗血清中免疫球蛋白会因污染、保存不当或过期而变质。尤其是化学修饰的IgG抗体容易被某些蛋白水解酶破坏,而细菌会产生此酶。
人体红细胞上还可检出300多个其他抗原。其中一些存在于其他组织内。系统抗原存在于除成熟红细胞以外的大多数人体细胞或血小板上。临床受血者产生抗体。
几乎所有人的特定细胞系都有的抗原称为高频或“公共”抗原,其他一些称为“私有”抗原。每个已知抗原都是检查血清中特异抗体时发现的。供阅读者参考
                                                                                                                                    —-江阴力博医药生物技术研究所—
                                                                                                                                                            2015.03.25